El material y los medios de cultivo donde vamos a crecer a los microorganismos deben de ser utilizados en condiciones asépticas para evitar su contaminación con los microorganismos presentes en el medio ambiente.
El mechero Bunsen no sólo permite crear una zona aséptica de trabajo, también nos permite esterilizar diverso instrumental como el asa de siembra o el asa de vidrio, mediante la aplicación directa de calor.
1. Lavado de manos
2. Lavado y desinfección de mesas
3. Crear un campo estéril en área de trabajo
4. Forrar mesa con papel
5. Flamear asa (posición perpendicular), procurar hacerlo con la parte alta del mechero
6. Antes de retirar el asa, flamear la parte metálica y se espera a que se enfríe. NO GOLPEAR EL ASA.
7. Flamear la boca de los tubos, matraces o frascos.
8. Después de quitar el algodón, nunca dejarlo sobre la mesa, se toma con el dedo meñique de la mano, siempre trabajando en la proximidad del mechero.
9. Uso de guantes y cubrebocas (solo el analista)
Esterilización del asa de siembra.
El asa de siembra o asa bacteriológica es probablemente la herramienta más usada por el microbiólogo. Consiste en un filamento con un lazo en uno de sus extremos. El otro extremo está unido a un mango. El filamento suele ser de una aleación metálica que se calienta muy rápidamente. Esta herramienta tan simple nos permite tomar un inóculo de un cultivo bacteriano y transferirlo a otro recipiente con medio de cultivo, o a un portaobjetos para su observación microscópica.
El asa de siembra debe de esterilizarse a la llama antes de usarla y después de haber sido usada. Debe de esterilizarse antes para evitar la contaminación de los microorganismos en estudio con otros microorganismos que estuvieran presentes en el filamento metálico. Debe de esterilizarse después de su uso para evitar que los microorganismos que hemos tomado contaminen el laboratorio o sean incluso un riesgo biosanitario.
Para esterilizar el asa de siembra ponerla lo más vertical posible y acercar el filamento a la llama del mechero Bunsen. Cuando todo el filamento se haya puesto al rojo vivo se habrá conseguido la esterilización. En ese momento retirarla y dejar enfriar antes de tomar la muestra, para evitar que el calor destruya a los microorganismos.
Esterilización del asa de vidrio por flameado con alcohol
El asa de vidrio es utilizada para la extensión de un inóculo por toda la superficie de una placa de agar. El vidrio no puede ser esterilizado mediante la aplicación de calor directo en el mechero Bunsen pues podría fundirse o quebrarse.
Para su esterilización, el asa debe de ser introducida en un bote conteniendo alcohol 96º. Después, escurrirla sacarla y flamearla a la llama del mechero Bunsen. Cuando el alcohol sea consumido el fuego se apagará por si solo. Esperar un poco para enfriar y proceder a usarla.
La esterilización por flameado del alcohol es usada también con otros materiales e instrumentos como pinzas, portaobjetos y cubre objetos, etc.
Precaución: Se recomienda tener mucho cuidado con el bote de alcohol. Conviene trabajar con el bote alejado de la llama del mechero. En caso de que el alcohol se prenda, mantener la calma. El fuego del alcohol se apaga fácilmente si tapamos el bote y dejamos que no haya oxígeno.
Manipulación de la caja
1. Siempre será en posición invertida (a menos que sea un medio líquido será en posición normal), antes de tomar el inoculo a sembrar.
2. Se toma de la base de la placa con la mano contraria, a la que sostiene el asa dejando la tapa a lado del mechero
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