Elaboración de un antibiograma

OBJETIVOS

• Determinar la sensibilidad a diversos antibióticos de un determinado microorganismo
• Comprender el concepto de antibiótico y su especificidad de acción sobre determinadas bacterias.
• Conocer el concepto de cepa sensible y resistente.
• Entender el concepto de halo de inhibición.
• Ser consciente de la importancia de la higiene y el cuidado en la manipulación de materiales biológicos.
• Comprender la importancia de la eliminación de los residuos orgánicos
• Conocer el instrumental de laboratorio necesario en microbiología y los procedimientos para su utilización

MATERIALES

• Jeringa con suero fisiológico estéril (solución de Nacl  al 0,9%)
• Placa “problema” (cultivada en agar-sangre)
• Discos de diferentes tipos de antibióticos (4-6 tipos distintos)
• Tubos de ensayo
• Placa agar-sangre
• Regla milimetrada
• Rotulador de vidrio
• Cinta adhesiva
• Pinzas finas
• Contenedor con lejía
• Torunda estéril
• Tablas para determinación de resistencias

DESARROLLO DE LA PRÁCTICA

Antes de empezar

• No se puede tocar nada que vaya a tomar contacto con la muestra biológica con las manos (depresor, asa de siembre, torunda,...) para evitar contaminaciones.
• Una vez utilizado este material ha de ser eliminado en un contenedor especial. Estos contenedores serán llevados posteriormente a una planta de tratamiento de residuos biológicos, donde serán incinerados.
• Todos los materiales o muestras tomadas deben estar perfectamente identificados: nombre, grupo, fecha e indicativo del tipo de muestra.
• Las placas sembradas deben sellarse con cinta adhesiva al finalizar para evitar su contaminación o la nuestra.
• Al acabar la práctica, se deben lavar bien las manos.

Siembra en césped del microorganismo problema

• Tomamos con una jeringa una pequeña cantidad de suero fisiológico estéril (2-5 ml) y lo vertemos en un tubo de ensayo.
• A partir de la placa problema, que contiene colonias del microorganismo cuya sensibilidad a los antibióticos queremos determinar, tomamos una muestraSUPERFICIAL de UNA SOLA COLONIA con un asa de siembra.
• Introducimos el asa de siembra con la muestra en el tubo y agitamos el asa para realizar una suspensión de las bacterias en el suero fisiológico. Al acabar echamos al contenedor de residuos el asa de siembra.
• Introducimos un hisopo estéril en el tubo, mojar el hisopo estéril en la suspensión. Escurrir el exceso de líquido contra las paredes del tubo de ensayo. Tapar el tubo e inocular la placa pasando muy suavemente por la superficie de la placa agar-sangre nueva. En esta ocasión realizaremos una siembra en césped, es decir, por toda la superficie de la placa, para conseguir que crezca bacterias de modo masivo (no interesa aislar bacterias como en la práctica del frotis faríngeo). Es importante que la siembra sea SUPERFICIAL, sin profundizar en el medio de cultivo.  (se puede Inocular dos veces más en ángulos de 60°)
• Se tapa la placa y se rotula indicando en el nombre, grupo y fecha y marcando con una A la tapa (Antibiograma)

Colocación de los discos de antibiótico

Tomando ahora con las pinzas - NUNCA CON LAS MANOS- un disco de cada uno de los antibióticos que se facilitan (cada disco es un papel de filtro que contiene una suspensión de uno varios antibióticos a la concentracion terapéutica). 

Se deposita el disco suavemente sobre la placa, sin tocar la superficie con las pinzas. es muy importante que el disco contacte con el medio de cultivo en un unico sitio. 

Realizamos la misma operación con los otros cinco antibióticos, colocando los nuevos discos separados de los anteriores, formando un hexágono.

Incubación y observación

Se llevan las placas a incubar a 37°C (temperatura corporal) durante 24 horas. tras este periodo se recogen las placas y SIN ABRIR se observa el crecimiento bacteriano. 

Medición del halo de inhibición

Por la parte trasera de la placa incubada mediremos el diámetro de los halos de inhibición que se han formado alrededor de los discos de antibiótico a los que la bacteria “problema” es sensible.

Anota los datos en la representación de la figura 2, indicando con un número del 1 al 6, el antibiótico colocado en el disco y dibujando la presencia o ausencia de halos y su tamaño en mm.

Con ayuda de las tablas que se te proporcionan determina si la bacteria es sensible (S) o resistente (R) a cada antibiótico y anótaloen la tabla, en las columnas correspondientes.


Resultados 

CONCLUSIONES
Mediante un Antibiograma podemos establecer qué tratamiento será el más adecuado para el paciente afectado por una infección por la bacteria que estemos estudiando.
¿Qué son los halos de inhibición? Alrededor de cada disco de antibiótico, las bacterias sensibles a ese antibiótico no habrán podido reproducirse y, por lo tanto, no forman colonias, dejando un hueco alrededor del disco.
¿Por qué se miden los halos? No basta con ver si las bacterias han crecido o no alrededor del antibiótico para saber si son o no sensibles. Hay que saber “cuánto” no han crecido. Solo si el halo de inhibición es suficientemente grande, usando el antibiótico a la concentración terapéutica –la que el antibiótico puede alcanzar en el lugar de la infección sin que se produzcan efectos tóxicos o secundarios- se dice que la bacteria es sensible al antibiótico. Por eso se mide el efecto y se consultan las tablas.